北京世联博研-荧光酶联免疫斑点检测分析生产厂家

荧光酶联免疫斑点检测分析原理

将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后，被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，并加入底物使其呈色，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。

1. 加入细胞到含有（或不含）刺激物中培养；

2. 阳性细胞开始分泌细胞因子，细胞因子就近被包被Antibody捕获；

3. 移出细胞，清洗板子，加入生物素标记的检测Antibody，形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构；

4. 为了观察膜上斑点的形成，加入酶标记的亲和素；

5. 加入显色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，就近沉淀在局部的膜上形成斑点；

6. 斑点计数（可用bioreader自动读板仪计数），数据处理，结果分析。

荧光酶联免疫斑点检测分析实验步骤与原理示意 （示意图如下）

大致原理上分为如下7个步骤，详情已具体产品说明书为准

Step.1 包被：将单clone捕获Antibody添加到乙醇处理的PVDF膜板上

Step.2 细胞孵育：在有刺激的情况下加入细胞，孵育，细胞分泌细胞因子

Step.3 捕获分泌物：activation后的细胞，分泌的细胞因子被周围的Antibody结合捕获

Step.4 检测Antibody：去除细胞，清洗平板，荧光酶联免疫斑点检测分析，加入生物素化的检测Antibody

Step.5 链霉亲和素-酶偶联物：加入链霉亲和素偶联物，保证后续在膜上形成斑点

Step.6 加反应底物：当酶催化时，荧光酶联免疫斑点检测分析价格，显色底物形成不溶性沉淀

Step.7 结果分析：在自动点阅读器中对结果进行分析。每个斑点对应一个分析物分泌细胞

03荧光酶联免疫斑点检测分析免疫学基础研究

根据检测的细胞因子的不同，ELISPOT可以用来区分被activation的不同的T细胞亚群。例如Th1细胞主要分泌IFN-γ，IL-2和TNF-α，而其他一些细胞因子如IL-4，IL-5和IL-13一般是由Th2细胞分泌的。在过敏研究中的一个热点就是采用ELISPOT测定Th2型细胞因子，荧光酶联免疫斑点检测分析生产厂家，因为Th2反应是过敏的主要反应，但通常都是低频率岀现，荧光酶联免疫斑点检测分析供应商，需要高度灵敏方法才能被成功检测到。

04过敏研究

在针对特异反应性过敏的免疫treat中监测T细胞免疫反应；在细胞介导的接触过敏的体外检测诊断的应用中，ELISPOT方法受到越来越多过敏工作者的关注。因为对于像Th2型反应主要细胞因子IL-4这样的一贯很难通过其他方法如 flow cytometry和ELISA检测到的因子来说，应用高灵敏度的ELISPOT方法对于研究过敏原特异性免疫反应显得尤为重要。