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酶联免疫吸附斑点简介

随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 ， 使体外检测各种细胞因子及Antibody研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法（ ELISA ）检测体液中游离的细胞因子（ CK ）或Antibody，酶联免疫吸附斑点价格，但由于游离的循环Antibody或 CK 的半哀期不同，酶联免疫吸附斑点，使之在体液中不断的被代谢或与target organ结合，而不能确切的反映体内的Antibody及 CK 的水平。 80 年代，国外的科研工作者根据 ELISA 技术的基本原理，建立了体外检测特异性Antibody分泌细胞和 CK 分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术（ ELISPOT ）。因其具有较高的特异性和敏感性，目前正被国内外广泛应用，对探索自身免疫系统疾病发病机制具有重要意义。

酶联免疫吸附斑点（ELISPOT）的原理是什么呢

（一）原理：细胞受到刺激后局部产生细胞因子，被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后，再与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。

（二）ELISPOT与ELISA的区别

1.ELISA通过显色反应，在Microplate reader上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。

2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，酶联免疫吸附斑点报价，1个斑点代表1个细胞，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。

3.由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。

4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb，在研究者以刺激剂activation细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。

T细胞的ELISpot分析应用：

B细胞ELISpot分析是分析Antibody免疫反应的有力工具，并且是仅有的少数能直接聚焦于Antibody分泌细胞（ASC）的分析方法之一。 这种J为灵敏的方法使研究人员能够识别样品中的ASC，并测量其总数以及那些对特定抗原分泌Antibody的数量。

例如，B细胞ELISpot可以揭示血液中长期记忆B细胞的数量，这是无法用其他方法评估的。B细胞ELISpot的主要应用包括检测B细胞对感染的反应和vaccine引发的反应。