北京世联博研公司-荧光菌斑检测分析仪

T细胞的ELISpot分析应用：

ELISpot是研究特异性免疫反应的敏感方法，能够区分活化的T细胞亚群。例如，Th1细胞产生干扰素-γ、IL-2和TNF-α，而Th2细胞产生其他细胞因子，如IL-4、IL-5和IL-13。例如，这被广泛应用于infectious disease、cancer、过敏和自身免疫性疾病的研究。

在vaccine研究中，ELISpot是一种标准工具，用于通过测量激发强大T细胞反应的能力(通常是干扰素-γ的分泌)来确定vaccine的有效性。基于ELISpot的诊断分析已经可用，包括一种通过测量T细胞对tuberculosis分枝Bacillus特定抗原的反应分泌干扰素-γ来检测tuberculosis病感染患者的测试。

荧光菌斑检测分析仪已成功应用领域

01感染性疾病诊断与研究

ELISPOT除了作为一种科研工具，荧光菌斑检测分析仪供应商，也被用于临床诊断。近期First个被SFDA批准的基于ELISPOT法的诊断平台(T-Spot.TB)上市。这项用于检测tuberculosis感染的测试方法，是通过测量tuberculosis特异性抗原刺激后的IFN-γ分泌情况来检测特异性的T细胞免疫反应。它可以代替传统的皮肤测试，同时大大提高了敏感性和特异性，并且不受卡介苗接种影响。ELISPOT还可用于其他感染性疾病如乙型hepatitis、丙型hepatitis、EB病毒、巨细胞病毒、莱姆病等的抗感染免疫研究与诊断。

02vaccine研究

ELISPOT方法是检测和评价vaccine的细胞免疫水平的国际公认的标准工具。国际上普遍采用IFN-γ ELISPOT法监测HIV vaccine研究中的免疫应答反应，在国际AIDS vaccine行动计划中的大量监测新型HIV候选vaccine的试验中采用ELISPOT法对评价T细胞功能。ELISPOT方法是通过测量vaccine诱导较强T细胞反应的能力，来定义vaccine的效果。在vaccine研发和设计时，可应用ELISPOT方法筛选确定抗原的特异性T细胞表位；这些信息还可以被用于评估合适的免疫策略以及免疫途径。

荧光菌斑检测分析仪（ELISPOT）的原理是什么呢

（一）原理：细胞受到刺激后局部产生细胞因子，被PVDF膜上特异性单clone Antibody捕获。细胞分解后，再与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF膜出现“紫色”的斑点为阳性反应。

（二）ELISPOT与ELISA的区别

1.ELISA通过显色反应，荧光菌斑检测分析仪，在Microplate reader上测定吸光度，与标准曲线比较得出可溶性蛋白总量。

2.ELISPOT通过显色反应，在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点，可直接在显微镜下或通过仪器对斑点进行计数，1个斑点代表1个细胞，荧光菌斑检测分析仪生产厂家，从而计算出分泌该蛋白的细胞的频率。

3.由于是单细胞水平检测，ELISPOT比ELISA和有限稀释法等更灵敏，能从20万～30万个细胞中检出1个分泌该蛋白的细胞。

4.捕获Antibody为高亲和力、高特异性和低内toxin McAb，在研究者以刺激剂activation细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。