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酶联斑点图像分析系统原理
将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养,酶联斑点图像分析系统,在有刺激的条件下,细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后,被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识,其后再与酶标记的亲和素作用,并加入底物使其呈色,有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。
1. 加入细胞到含有(或不含)刺激物中培养;
2. 阳性细胞开始分泌细胞因子,细胞因子就近被包被Antibody捕获;
3. 移出细胞,清洗板子,加入生物素标记的检测Antibody,形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构;
4. 为了观察膜上斑点的形成,酶联斑点图像分析系统哪家好,加入酶标记的亲和素;
5. 加入显色底物,在酶的催化分解下,生成不可溶的色素,就近沉淀在局部的膜上形成斑点;
6. 斑点计数(可用bioreader自动读板仪计数),数据处理,结果分析。
酶联斑点图像分析系统已成功应用领域酶联斑点图像分析系统已成功应用领域
01感染性疾病诊断与研究
ELISPOT除了作为一种科研工具,也被用于临床诊断。近期First个被SFDA批准的基于ELISPOT法的诊断平台(T-Spot.TB)上市。这项用于检测tuberculosis感染的测试方法,是通过测量tuberculosis特异性抗原刺激后的IFN-γ分泌情况来检测特异性的T细胞免疫反应。它可以代替传统的皮肤测试,同时大大提高了敏感性和特异性,并且不受卡介苗接种影响。ELISPOT还可用于其他感染性疾病如乙型hepatitis、丙型hepatitis、EB病毒、巨细胞病毒、莱姆病等的抗感染免疫研究与诊断。
02vaccine研究
ELISPOT方法是检测和评价vaccine的细胞免疫水平的国际公认的标准工具。国际上普遍采用IFN-γ ELISPOT法监测HIV vaccine研究中的免疫应答反应,在国际AIDS vaccine行动计划中的大量监测新型HIV候选vaccine的试验中采用ELISPOT法对评价T细胞功能。ELISPOT方法是通过测量vaccine诱导较强T细胞反应的能力,酶联斑点图像分析系统厂家,来定义vaccine的效果。在vaccine研发和设计时,可应用ELISPOT方法筛选确定抗原的特异性T细胞表位;这些信息还可以被用于评估合适的免疫策略以及免疫途径。
酶联斑点图像分析系统简介
随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 ,酶联斑点图像分析系统报价, 使体外检测各种细胞因子及Antibody研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或Antibody,但由于游离的循环Antibody或 CK 的半哀期不同,使之在体液中不断的被代谢或与target organ结合,而不能确切的反映体内的Antibody及 CK 的水平。 80 年代,国外的科研工作者根据 ELISA 技术的基本原理,建立了体外检测特异性Antibody分泌细胞和 CK 分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术( ELISPOT )。因其具有较高的特异性和敏感性,目前正被国内外广泛应用,对探索自身免疫系统疾病发病机制具有重要意义。
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