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酶联免疫斑点技术（Enzyme Linked Immunospot Assay，简称ELISPOT）

是细胞免疫学研究中更敏感的检测方法，可以在单细胞水平对Antibody分泌细胞(ASC)及细胞因子(CK)分泌细胞进行检测，比ELISA和有限稀释法等具有更髙的灵敏性，能从20万-30万细胞中检岀1个分泌该蛋白的细胞。并且该方法能够对抗原刺激后的Living cells进行功能性检测，具有较髙的特异性、直观可信度髙，并且易操作，已被广泛用于分泌CK细胞检测或ASC测定中，在国内外免疫学界获得了广泛的应用。

ELISPOT实验步骤

淋巴细胞受到抗原刺激后局部产生细胞因子，此细胞因子被ELISPOT板底PVDF膜上(预包被的)的特异性单抗捕获。去除细胞后，BIOREADER 5000 E b，BEI捕获的细胞因子与生物素标记的单抗结合，其后再与碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记的亲和素结合。加底物显色后，PVDF膜上出现紫色或红褐色的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过酶联免疫斑点分析仪（ELISPOT Reader）对斑点的进行自动计数和分析。

BIOREADER 5000 E b原理

将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养，在有刺激的条件下，细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后，被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识，其后再与酶标记的亲和素作用，BIOREADER 5000 E b报价，并加入底物使其呈色，BIOREADER 5000 E b价格，有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。

1. 加入细胞到含有（或不含）刺激物中培养；

2. 阳性细胞开始分泌细胞因子，细胞因子就近被包被Antibody捕获；

3. 移出细胞，清洗板子，加入生物素标记的检测Antibody，形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构；

4. 为了观察膜上斑点的形成，加入酶标记的亲和素；

5. 加入显色底物，在酶的催化分解下，生成不可溶的色素，就近沉淀在局部的膜上形成斑点；

6. 斑点计数（可用bioreader自动读板仪计数），数据处理，结果分析。

酶联斑点elispot检测分析仪

德国biosys bioreader品牌

至少包含酶联斑点分析、病毒噬斑等的检测分析功能，符合数据的采集和分析的规范。软件包含触控操作功能；一体化软件，BIOREADER 5000 E b哪家好，在同一软件中，可同步完成斑点图像扫描、斑点计数与数据分析。

定焦镜头：可针对96孔板酶联斑点/荧光斑点分析；变焦镜头可针对其他各种板型分析。双镜头均可自动切换，自动曝光调节，自动聚焦